cccDNA检测——为包皮包茎治疗指明了方向

        cccDNA检测——能准确了解当前治疗效果。药物不能清除病毒的根本原因是病毒复制模板的存在，药物只对病毒有作用，但对病毒复制模板毫无办法，所以导致病毒不断复制。通过cccDNA检测，我们可以清楚地知道复制模板的数量和清除情况。包皮包茎病毒复制模板的数量能够说明包皮包茎病毒复制是否活跃，而了解清除情况对患者下一步的治疗有着决定性与指导性的意义。该检测适合包皮包茎病毒携带者、初步确诊的男科患者以及正在治疗的男科患者。新化男科医院PCR基因诊断实验室对cccDNA进行定量定性检测，以了解肝内病毒清除状况，从而使患者了解治疗进展，制定有针对性的治疗方案。

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        细胞外乙型肝炎病毒DNA是一种松弛环状的双链DNA（rcDNA）分子，其两条链均不是闭合的，负链较长，正链较短，均有一定的缺口。在包皮包茎病毒的复制过程中，病毒DNA进入宿主细胞核，在DNA聚合酶的作用下，两条链的缺口均被补齐，形成超螺旋的共价、闭合、环状DNA分子（cccDNA）。cccDNA是包皮包茎病毒前基因组RNA复制的原始模板，虽然其含量较少，每个肝细胞内只有约5～50个拷贝，但对包皮包茎病毒的复制以及感染状态的建立具有十分重要的意义，只有清除了细胞核内的cccDNA，才能彻底消除包皮包茎患者病毒携带状态，是抗病毒治疗的目标。

        由于PCR技术灵敏度极高，rcDNA和cccDNA的序列又具有高度的同源性，因此在用PCR技术检测cccDNA时，必须确保只能扩增cccDNA而rcDNA不被扩增。目前利用rcDNA和cccDNA结构上的差异可以解决这一问题。由于rcDNA的正链和负链上均存在缺口，故可以设计跨越两个缺口的引物，使rcDNA不会被扩增，而cccDNA由于是完整的双链结构则可以被选择性扩增。在PCR检测cccDNA时，起始模板量不能过高，否则rcDNA也有可能被扩增，研究发现每个PCR反应管中HBV-DNA的量在1pg（约6×105拷贝）时能达到最佳的灵敏度与选择性，因此在分析前应估计标本中HBVDNA的量。虽然套式PCR更为灵敏，但由于需取PCR产物进行再次扩增，因此在操作中要注意防止PCR产物污染，避免假阳性。

        在定性检测的基础上，可以进一步对cccDNA进行定量检测。仍以PCR定量分析技术中，尤其是竞争PCR技术的敏感性和精确度高。实时荧光定量PCR检测cccDNA的方法通过PCR仪对产生的荧光信号进行实时监测，从而对cccDNA进行定量。每扩增一个cccDNA分子，就会产生一个荧光信号，根据信号的强弱来定量。

        包皮包茎病毒cccDNA检测是评价抗包皮包茎病毒药物的新指标，是评价抗包皮包茎病毒是否能感染肝外组织的客观指标之一，是评价包皮包茎患者当前病情及治疗效果的指标。可见包皮包茎患者提高对cccDNA检测的认识是十分必要的，cccDNA检测 对包皮包茎的治疗起着至关重要的作用。新化男科医院采用目前治疗包皮包茎的热门疗法——新免疫靶向疗法，使诸多包皮包茎患者达到临床治愈，重新拥有快乐和谐的生活。